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以下為正文：
Q1. 怎么改變流動(dòng)相比例來(lái)延長(zhǎng)保留時(shí)間?
問(wèn)題描述：
做的黃酮苷，用甲醇+乙腈+四氫呋喃+醋酸(1:1:19.4:78.6)溶液做流動(dòng)相，現(xiàn)在分離效果不理想，想延長(zhǎng)保留時(shí)間看看怎么樣，也就是增大流動(dòng)相的極性，給點(diǎn)建議，謝謝！PS：用的C18柱。
解答：
用液相色譜，C18柱分離黃酮苷，不是太清楚為什么要選用甲醇+乙腈+四氫呋喃+醋酸這樣一種很復(fù)雜的流動(dòng)相體系，難道體積分?jǐn)?shù)78.6%的醋酸是直接用的冰醋酸？這是一種很不可思議的流動(dòng)相配比。建議直接使用甲醇-水，或是乙腈-水作為流動(dòng)相，水相中可以適當(dāng)加點(diǎn)甲酸或是乙酸來(lái)得到最佳分離效果。
Q2. 保留時(shí)間為什么總在變？
問(wèn)題描述：
苯甲酸的測(cè)定中流動(dòng)相走了很久，進(jìn)樣以后，保留時(shí)間還是變，難道這個(gè)項(xiàng)目的柱子這么難平衡么？
解答：
保留時(shí)間一直在變，說(shuō)明系統(tǒng)沒(méi)有平衡好，可以從多個(gè)方面去排查原因。
a.流動(dòng)相可能是最主要的原因，流動(dòng)相平衡時(shí)間是否充足，管路有沒(méi)有氣泡，流動(dòng)相中有機(jī)相是否蒸發(fā)，比例閥工作是否正常？
b.泵有可能存在問(wèn)題，輸液是否正常，壓力是否穩(wěn)定，泵密封墊是否完好，是否有漏點(diǎn)？
c.色譜柱也需要排查，是否恒溫，是否有漏液？
Q3. 液相色譜中影響峰擴(kuò)散的有那些因素？
問(wèn)題描述：
液相色譜中影響峰擴(kuò)散的有那些因素？與氣相色譜相比，有哪些不同之處？
解答：
氣相色譜與液相色譜在速率理論方程上的差異主要是由于氣體與液體的性質(zhì)差異造成的。液體的黏度比氣體大約100倍，表面張力大約10000倍，密度大約1000倍；氣體還具有高壓縮性系數(shù)。溶質(zhì)在液體中的擴(kuò)散系數(shù)要遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于在氣體中，液相在傳質(zhì)過(guò)程中對(duì)理論塔板高度的影響尤其的大。與氣相色譜速率理論方程不同的是，液相色譜增加了固定相孔結(jié)構(gòu)內(nèi)滯留流動(dòng)相傳質(zhì)項(xiàng)。
因此我們可以得知主要有以下幾個(gè)方面會(huì)影響色譜峰擴(kuò)張：
1.渦流擴(kuò)散
渦流擴(kuò)散是由于柱填料粒徑大小不同及填充不均勻等因素造成的流動(dòng)相在色譜柱內(nèi)遷移過(guò)程中發(fā)生的渦流運(yùn)動(dòng)。
2.分子擴(kuò)散
分子是由于進(jìn)樣后，溶質(zhì)分子在柱內(nèi)縱軸上存在濃度梯度，引起濃差擴(kuò)散而使譜帶展寬。由于液體流動(dòng)相的傳質(zhì)速度較慢，分子擴(kuò)散項(xiàng)B/u可以忽略不計(jì)。
3.傳質(zhì)阻力
溶質(zhì)分子與固定相、流動(dòng)相分子間存在相互作用，擴(kuò)散、分配、轉(zhuǎn)移的過(guò)程并不是瞬間達(dá)到平衡，實(shí)際傳質(zhì)速度是有限的，總是存在超前與滯后現(xiàn)象。這使色譜柱總是在非平衡狀態(tài)下工作，從而產(chǎn)生峰展寬。
4 流速
一般難以觀察到最低H對(duì)應(yīng)的最佳流速，因?yàn)榱魉俳档停琀總是降低。當(dāng)u>uopt時(shí)，H隨著u升高而升高，傳質(zhì)引起的色譜峰擴(kuò)張也會(huì)更明顯。
5 固定相顆粒大小
渦流擴(kuò)散項(xiàng)A和流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)Cm均與柱填料粒徑dp的平方成正比，所以固定相粒徑與色譜峰擴(kuò)張有很大的關(guān)系。
6 柱溫
色譜柱溫直接影響到分子在固定相和流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)DS和Dm，從而影響分子擴(kuò)散和傳質(zhì)的速率。柱溫升高，DS和Dm升高，分子擴(kuò)散導(dǎo)致柱效降低；而傳質(zhì)改善又導(dǎo)致柱效升高；因此柱溫對(duì)色譜峰擴(kuò)張的影響是矛盾的。
Q4. 液相色譜使用緩沖鹽的注意事項(xiàng)
解答：
1、避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對(duì)鋼質(zhì)有腐蝕作用。
2、緩沖液最好要現(xiàn)配現(xiàn)用，往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液，隔天或放置長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)有很多怪現(xiàn)象發(fā)生。
3、實(shí)驗(yàn)后不可用有機(jī)溶劑直接過(guò)度，有機(jī)溶劑會(huì)處使鹽類析出，造成液路或色譜柱堵塞，可用95：5的水甲醇沖洗。
4、使用緩沖液要及時(shí)掌握pH范圍，做到胸中有數(shù)。
5、清洗液路和柱子時(shí)，有溫控可加熱到30℃易于沖洗。
6、長(zhǎng)時(shí)間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無(wú)析出，若有白色鹽類析出，可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路(拆下柱子，走30ml，再用5倍水沖洗)可以避免液路的堵塞。
7、選擇緩沖液要用可靠的試劑，避免不純的鹽類造成不必要的麻煩。
如果流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例很高是不能用來(lái)沖洗緩沖鹽的，是洗不出來(lái)的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇沖洗，是可以把緩沖鹽沖洗出來(lái)的，然后用純的有機(jī)溶劑來(lái)保護(hù)柱子。最好的方法是使用與流動(dòng)相相同濃度不含鹽的流動(dòng)相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換，一般在15分鐘以內(nèi)最好，且用0.8的流速較好。如果用純水沖，容易造成鍵合的碳鏈的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液沖。可以用純水代替流動(dòng)相中的緩沖液，有機(jī)相不變。這樣沖洗柱子比較穩(wěn)妥。
Q5. 影響出峰時(shí)間的因素有哪些？
問(wèn)題描述：
pH值不同出峰時(shí)間不同，具體原理是什么？除了pH值會(huì)影響，還有其他因素嗎？
解答：
流動(dòng)相的pH值主要是影響到分配系數(shù)而出峰時(shí)間的不同。
影響出峰時(shí)間的因素有很多，從分配系數(shù)、容量因子等各個(gè)方面考慮，與目標(biāo)化合物在固定相和流動(dòng)相中的分配性質(zhì)有關(guān)，還與流速，壓力，柱溫等液相色譜儀參數(shù)有關(guān)，具體涉及下面幾種因素的影響：
a.目標(biāo)化合物本身，具體包括分子量、結(jié)構(gòu)、化合物類型、極性等；
b.流動(dòng)相，具體包括流動(dòng)相構(gòu)成、配比、流動(dòng)相各組分極性，洗脫方式，流速等；
c.固定相，具體包括固定相種類，結(jié)構(gòu)，色譜柱長(zhǎng)度等；
d.分配系數(shù)與容量因子，具體包括化合物在流動(dòng)相與固定相之間的分配情況，柱溫等。
Q6. 有沒(méi)有方法將保留時(shí)間提前？
問(wèn)題描述：
我現(xiàn)在用液相色譜做含量測(cè)定時(shí)，保留時(shí)間太長(zhǎng)，20分鐘左右才出峰，有沒(méi)什么方法提前，原理是什么？
解答：
可以從通過(guò)改變目標(biāo)組分容量因子k的方式，以及縮短柱長(zhǎng)增加柱溫等方式，具體可以采取以下方法：
a.調(diào)整流動(dòng)相，具體包括流動(dòng)相構(gòu)成、配比、流動(dòng)相各組分極性，洗脫方式，提高流速等；
b.調(diào)整固定相，具體包括固定相種類，結(jié)構(gòu)，縮短色譜柱長(zhǎng)度等；
c.增加柱溫，降低流動(dòng)相傳質(zhì)阻力等。
Q7. 流動(dòng)相使用前為什么要脫氣？
解答：
首先我們了解一下不脫氣可能造成的影響：
氣泡會(huì)增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無(wú)法分析（噪聲增大，基線不穩(wěn)，突然跳動(dòng)）。
溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相（如烷基胺）發(fā)生反應(yīng)，降解而改變柱的分離性能。
溶解氧能與某些溶劑（如甲醇、四氫呋喃）形成有紫外吸收的絡(luò)合物，此絡(luò)合物會(huì)提高背景吸收（特別是在260nm以下），并導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度的輕微降低，會(huì)在梯度淋洗時(shí)造成基線漂移或形成鬼峰（假峰）。
若用FLD（熒光檢測(cè)器），溶解氧在一定條件下還會(huì)引起淬滅現(xiàn)象，特別是對(duì)芳香烴、脂肪醛、酮等。在某些情況下，熒光響應(yīng)可降低達(dá)95%。
脫氣的作用：除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過(guò)程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測(cè)器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。
排出氣泡能減少泵工作的傷害，提高UV檢測(cè)器的性能高，改善靈敏度。
脫氣的方式：加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染，同時(shí)需要考慮低沸點(diǎn)溶劑揮發(fā)造成的組成變化。
抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。
超聲脫氣法：流動(dòng)相放在超聲波容器中（一般500ml溶液需超聲20~30min），此法不影響溶劑組成。超聲時(shí)應(yīng)注意避免溶劑瓶與超聲槽底部或壁接觸，以免玻璃瓶破裂，容器內(nèi)液面不要高出水面太多。
氦氣脫氣法：在色譜操作前和進(jìn)行時(shí)，將惰性氣體噴入溶劑中。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，此方法不能將溶劑脫氣，它只是用一種低溶解度的惰性氣體（通常是氦）將空氣替換出來(lái)。主要利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。
在線真空脫氣法：利用在線脫氣機(jī)在線脫氣，智能控制，無(wú)需額外操作，成本低，
脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。
Q8. 怎樣提高高效液相色譜法的柱效？
解答：
1.要想提高液相色譜法的柱效，應(yīng)當(dāng)用小而均勻的固定相顆粒填充均勻，以減小渦流擴(kuò)散和流動(dòng)相傳質(zhì)阻力，這是最佳的提升柱效的方法。
2.改進(jìn)固定相的結(jié)構(gòu)，可以減小滯留流動(dòng)相傳質(zhì)阻力以及固定相傳質(zhì)阻力。
3.選用低粘度的流動(dòng)相(如甲醇、乙腈等)，也有利于減小傳質(zhì)阻力，提高柱效。
4.合適的柱溫，也會(huì)影響到柱效。
5.降低流速、增加柱長(zhǎng)也可以提高柱效。
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