如何做好溶殘檢測？

殘留溶劑的測定一般采用氣相色譜法，推薦使用毛細管色譜柱-  頂空進樣系統，當然也可以使用普通填充柱，溶液直接進樣方法。對不宜采用氣相色譜法測定的含氮堿性化合物，如N- 甲基吡咯烷酮等可采用其它方法，如離子色譜法等。測定殘留溶劑應從以下幾個方面考慮：確定被測的有機溶劑、選擇合適的色譜柱、制備供試品溶液和對照品溶液、選擇合適的進樣方法和滿足檢測靈敏度要求的檢測器，下面分別進行介紹：

1 、確定被測的有機溶劑

根據制備工藝確定被測有機溶劑的范圍。通常應對制備工藝過程中使用的二類以上溶劑和重結晶用溶劑，以及根據工藝特點要求的其它溶劑進行殘留量的研究。建議對合成最后三步使用的三類溶劑也進行研究，這樣能更好地對未知峰進行歸屬；對制劑過程中使用的有機溶劑也建議考察其殘留情況，特別是緩、控釋微丸包衣過程使用的有機溶劑更應引起注意。

殘留溶劑的限度要求同ICH的規定。

2 、選擇合適的色譜柱

按照相似相溶的原理選擇色譜柱。毛細管柱有極性柱、非極性柱、弱極性柱和中等極性柱。填充柱有高分子多孔小球或涂漬適宜固定液的填充柱。測定含氮的堿性有機溶劑時，由于普通氣相色譜儀的不銹鋼管路、進樣器襯管等對有機胺等含氮的堿性化合物具有較強的吸附作用，致使其檢出的靈敏度降低。通常采用弱極性色譜柱或經堿處理過的色譜柱分析含氮的堿性有機溶劑，如果采用胺分析專用柱進行分析，則效果更好。

3 、供試品和對照品的制備

頂空進樣方法通常以水為溶劑，對于非水溶性的藥物，可采用DMF 、DMSO或其他適宜溶劑。溶液直接進樣方法用水或合適的溶劑溶解樣品。制備供試品的溶劑的選擇應兼顧供試品和被測有機溶劑的溶解度，且所用溶劑應不干擾被測有機溶劑的測定。水是首選溶劑，特別是頂空進樣系統。因為水中不含有機溶劑，故干擾較少，且在  FID 檢測器上，以水為溶劑時，各殘留溶劑的靈敏度最高。當藥物不溶于水時，可加入適當的酸或堿以增加藥物的溶解度，最好選用不揮發的酸或堿。以DMSO  等為溶劑時，可加入一定量的水以增加檢測的靈敏度，或用鹽析的方法增加靈敏度。測定含氮的堿性溶劑時，供試品溶液應不呈酸性，以免被測物與酸反應后不易汽化。對照品的制備方法應與供試品的制備方法相同。在申報資料中發現對照品（溶液）為直接進樣，供試品則為固體直接頂空進樣，供試品和對照品不但制備方法不同，而且進樣方法和進樣量也不同，無法進行比較。提請申報單位注意。

4 、供試品溶液和對照品溶液濃度的確定

配制供試品溶液的濃度應滿足定量測定的需要，一般供試品取樣量在0.1 ～  1g之間。限度檢查時對照品溶液的濃度可按規定的限度配制，定量測定時按實際殘留量配制，濃度相差最好以不超過 2  倍為宜。

5  、檢測器的選擇

一般選用FID檢測器，對含鹵素的有機溶劑如氯仿等，采用  ECD檢測器可得到更高的靈敏度。通常可根據藥物溶劑的殘留情況選擇合適的檢查方法。當需要檢查的有機溶劑數量不多，且極性差異較小時，可選擇毛細管色譜柱 -  頂空進樣-等溫法。當需要檢查的有機溶劑數量較多，且極性、沸點差異較大時，可選擇毛細管色譜柱  -頂空進樣-  程序升溫法；也可選擇填充柱或適宜極性的毛細管柱直接進樣法。限度檢查（一類、部分二類溶劑）時采用內標法或外標法；定量測定（含量超過0.1%的二類或需要定量控制的三類溶劑）時采用內標法或標準加入法。

頂空進樣法還要對頂空溫度和頂空時間進行選擇

頂空溫度應根據溶解供試品溶劑的特性及供試品中殘留溶劑的沸點選擇。以水為溶劑及測定低沸點殘留溶劑時，頂空溫度不宜超過85 ℃；測定沸點較高的殘留溶劑時，通常選擇較高的頂空溫度；但此時應兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產生的揮發性熱分解產物干擾測定結果。以  DMSO為溶劑時，頂空溫度不宜超過115  ℃。例如，在申報資料中發現，以水為溶劑，頂空溫度為100 ℃，柱溫  60℃，結果高濃度的乙腈比低濃度的二氯甲烷的峰面積還小，原因是頂空溫度太高，大量的水被蒸發（或濃度被稀釋），隨著水蒸汽的凝結，在水中溶解度大的乙腈的靈敏度下降，產生了與事實不符的實驗結果。

頂空時間是要確保供試品溶液的氣-液兩相達到平衡，一般通過測定頂空時間與頂空氣體濃度的濃度  —時間曲線來確定。頂空時間不宜過長，一般為30  ～45分鐘，如果超過  60min ，可能引起頂空瓶的氣密性變差, 導致定量的準確性降低。如果平衡時間選擇 10分鐘，就不能保證氣 - 液兩相達到平衡。

注意對照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。

甲酰胺、2－甲氧基乙醇、 2  －乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不適宜用頂空法測定。

1  、系統適用性試驗

柱效：用被測物的色譜峰計算，填充柱法的理論板數應大于1000 ，毛細管色譜柱的理論板數應大于  5000。
   

分離度：色譜圖中被測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應大于1.5  。

重復性：以內標法測定時，對照品溶液連續進樣5次，所得被測物與內標物峰面積之比的相對標準偏差 (RSD)應不大于5%  ；以外標法測定時，所得被測物峰面積的相對標準偏差 (RSD)應不大于 10% 。

2 、準確度

在規定的范圍內，至少9個測定結果。設計三個不同的濃度進行測定，計算回收率和相對標準偏差，含量測定的回收率應大于  98%。

進行回收率試驗時，由于采用頂空進樣系統，供試品與對照品處于不完全相同的基質中，此時應考慮氣- 液平衡過程中的基質效應。標準加入法可以消除供試品溶液基質與對照品溶液基質不同所致的基質效應的影響，故通常采用標準加入法驗證定量方法的準確性。當標準加入法與其它定量方法的結果不一致時，應以標準加入法的結果為準。

標準加入法為精密稱（量）取被測定的殘留溶劑對照品適量，配制成適當濃度的對照品溶液，取一定量精密加入到供試品溶液中，根據外標法或內標法測定殘留留劑的含量，再扣除加入的對照品溶液的含量，即得供試液溶液中殘留溶劑的含量；或按下式計算殘留溶劑的量。Cx=ΔCx/[  （Ais/Ax） -1]  ，式中Cx為供試品中組分  X的濃度；Ax 為供試品中組分 X 的色譜峰面積；ΔCx 為所加入的已知濃度的被測組分對照品；Ais 為加入對照品后組分 X 的色譜峰面積。

3 、專屬性

對各種殘留溶劑定位和進行混合溶劑的分離度試驗，并附代表性圖譜。

供試品中的未知雜質或其揮發性熱降解產物易對殘留溶劑的測定產生干擾。如果未知雜質或其揮發性熱降解產物與被測物的保留值相同（共出峰），或熱降解產物與被測物的結構相同（如甲氧基熱裂解產生甲醇）時，應通過試驗排除干擾。對第一類干擾，通常采用在另一種極性相反的色譜柱系統中對相同樣品進行測定，比較不同色譜系統的測定結果的方法。如二者結果一致，則可以排除測定中有共出峰的干擾；如二者結果不一致，則表明測定中有共出峰的干擾。對第二類干擾，通常要通過測定已知不含該溶劑的對照樣品來加以判斷。

4、其它

可根據是限度檢查還是定量測定選擇具體的驗證內容。
精密度：重復性和重現性，在規定范圍內，至少  9個測定結果。設計三個不同的濃度進行測定。一般保留時間的 RSD<1%  ，峰面積的RSD<5%。

線性：至少制備5個濃度， R=0.99  。附回歸方程、相關系數和線性圖。

檢測限和定量限：檢測限為信噪比3:1或  2:1 時相應濃度或注入儀器的量。定量測定時需驗證定量限，其限度為信噪比10:1  時相應濃度或注入儀器的量。同時說明測試的過程和結果，并附圖譜。

以上是對殘留溶劑檢查方法研究的一些看法和建議，供大家參考。